生命科學的研究已進入了細胞組學的研究，科學家們渴求探究細胞深層次和綜合性信息，既提供細胞群體的群體信息，也關注個體細胞的差異，既能看到細胞表型的特點，更能研究細胞的功能，但目前的流式細胞技術已無法滿足科學家們的應用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多維全景流式細胞儀一次實現了從群體到個體，從表型到功能的綜合細胞分析，流式細胞技術進入了嶄新的時代。
 

FlowSight是下一代專家級流式細胞儀
FlowSight是一款體積小巧，但是功能強大的下一代專家級流式細胞儀。該系統革命性地設計提高了信噪比以及熒光檢測的靈敏度。標配12個檢測通道，除了傳統熒光強度信息，還能獲得“每個細胞”的明場、暗場以及10個熒光圖像。FlowSight可以多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器于SSC信號檢測，同時還可配置96孔板自動上樣系統（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高檢測靈敏度，特別對于弱信號的檢測，有明顯的優勢。
 

FlowSight突破傳統流式局限，實現圈門不再靠猜
FlowSight與其他傳統流式細胞儀不同之處在于它帶來了每個細胞的真實圖像。對于每個細胞，它能夠生成12張圖片。所獲得的圖片能夠鑒別來自細胞質、細胞膜和細胞核的熒光。您只需點擊散點圖中的每個點或直方圖中的每個點，即可查看與之對應的細胞圖片。因此使用者再也不用靠猜測來判斷設門是否準確。在FlowSight中，設門后，使用者可以通過觀察所設門內外的細胞圖片來確認設門是否準確。

FlowSight拓展了流式細胞技術的應用范圍，獲得好的深入的細胞信息
1. 細胞周期細化分析
FlowSight可以將細胞周期分析和有絲分裂細胞分析結合起來。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對THP-1細胞周期進行分析（如下圖左圖所示），通過觀察每個時期的細胞圖片，FlowSight不僅可以分析細胞的G0/G1,S,G2/M期，還可將M期細分為分裂前期，中期，晚期，末期，獲得全面的細胞周期數據。
 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用來鑒別血細胞亞群。FlowSight多能夠同時檢測10色熒光，大程度地滿足研究者的實驗需求。在這個例子中，研究人員用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對細胞進行標記。通過一系列設門分析，他們鑒別了以下細胞類群： (A) CD3+ T細胞, CD4+ 輔助T細胞; (B) CD16+ 粒細胞; (C) CD19+ B 細胞; (D) CD14+ 單核細胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細胞.

3．NFkB核轉位研究
NF-κβ作為一種廣泛存在的轉錄因子，被激活由胞漿轉入胞核，從而參與炎癥反應、免疫反應、細胞凋亡、腫瘤發生等。可以將細胞核和NF-κβ分別用DAPI和FITC染色，FlowSight可觀察每個細胞是否發生 NF-κβ核轉位，并量化分析NFkB核轉位程度以及發生核轉位細胞的比例。

FlowSight革命性地光路設計，實現*應用
FlowSight系統平臺也是由液流系統，光學系統和電子系統等三大部分組成。液流系統將樣本細胞懸液和系統鞘液注入流動室中，使細胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個流過檢測窗口。光學系統中光源照射通過檢測窗口的細胞，從而產生光信號。光源分為兩種，其一用于產生明場細胞圖像，另一種是用于產生熒光細胞圖像的激光器。光源照射細胞產生的光信號被大數值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統傳遞到由二向色鏡構成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）。光信號在這里被分成不同波段投射到TDI CCD的相應檢測通道上，產生一個明場細胞圖像，一個暗場細胞圖像（Side Scatter，SSC）及至多10個不同熒光通道的細胞圖像。FlowSight的光路系統能夠自動調整焦距，并實時測定細胞運動速度，而其采用高航空遙拍CCD進行信號采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述這些手段保證了系統采集到的細胞圖像的質量和熒光信號的靈敏度。

 
綜上，FlowSight多維全景流式細胞儀，采用革命性的技術，解決了傳統流式細胞儀無法獲得細胞個體信息的局限，真正讓流式細胞儀睜開了“眼睛”，不僅可以對大量細胞進行統計學分析，而且還能觀察細胞形態，大地拓展了傳統流式細胞儀的應用。雖然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技術已經非常成熟，裝機已經超過200臺，超過300篇文獻發表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。
 

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